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    玻璃层析柱的使用方法

    发布时间: 2022-06-18  点击次数: 27次
       玻璃层析柱适用于分子筛、离子交换、凝胶渗透与亲和层析。随着液相层析法进入血液制品生产,利用层析法,可纯化血浆中多种蛋白,例如白蛋白等等。下面让我们一起来了解一下玻璃层析柱的使用方法吧。
      先用洗液洗净层析柱,用水清洗后再用蒸馏水清洗、干燥,在层析柱底铺一层玻璃纤维或脱脂棉,而后将吸附剂氧化铝装入柱内。
      装入的方法分湿法和干法两种,湿法是将备用的溶剂转入管内,将氧化铝和溶剂调成浆状慢慢地倒入管中,此时应将管的下端活塞打开使溶剂慢慢流出,吸附剂即渐渐沉子管底,加完氧化铝后继续使溶液流出,直至氧化铝的沉降不再变动;
      干法是在管上端放一漏斗,使氧化铝均匀地经漏斗成一细流慢慢装入管内,中间不应间断,时时轻轻敲打玻璃管使填转均匀,全部加入后再加入溶剂使氧化铝全部润湿。
      一般以湿法装柱为宜,因为容易把夹杂在氧化铅中的气泡赶出,无论采用那一种方法装柱,必须注意以下事项。
      ①不能使氧化铝中有裂缝和气泡,否则影响分离效果。
      ②氧化铝的高度一般为玻璃管高度的3/4。
      ③装好的氧化铝柱上面覆盖一层滤纸、玻璃纤维或脱脂棉以保持氧化铝上端顶部平整,不受流入溶剂的干扰。
      ④氧化铝柱上面要保持约0. 5 ~ lcm高的溶剂层,勿使氧化铝露出溶剂的液面,上面装一分液漏斗。
      待柱装妥后,然后加样,把将要分离的样品溶在一定体积的溶剂中配成样品溶液,将氧化铝上的多余溶剂排出,直到柱内液面到达氧化铝的表面时,停止排放。沿管壁加入样品溶液,注意不让溶剂把氧化铝冲松浮起,样品溶液加毕后,开放活塞使液体渐渐放出至溶剂液面和氧化铝表面齐平(勿使氧化铝表面干燥)。
      样品吸附在氧化铝柱上后,用合适的溶剂进行洗脱,样品中各组分在氧化铝上经过吸附、溶解、再吸附、再溶解······,规律地自上而下移动,使样品分成若干色圈(或称色环),达到分离、提纯目的。
      必须注意层析柱的直径愈粗形成的色圈愈狭小,色带相互之间排列愈紧,对分辨和分离难度要大一些,但分离时间较短,速度较快,柱细长对色带相互之间距离增大容易分开,但分离时间长,对装填吸附剂操作不方便,通常选择柱的直径与长度的比例在1:30或1:25及1:20的范围比较合适。
     
     
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