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玻璃层析柱的使用方法
发布时间： 2022-06-18 点击次数： 1485次玻璃层析柱适用于分子筛、离子交换、凝胶渗透与亲和层析。随着液相层析法进入血液制品生产，利用层析法，可纯化血浆中多种蛋白，例如白蛋白等等。下面让我们一起来了解一下玻璃层析柱的使用方法吧。先用洗液洗净层析柱，用水清洗后再用蒸馏水清洗、干燥，在层析柱底铺一层玻璃纤维或脱脂棉，而后将吸附剂氧化铝装入柱内。装入的方法分湿法和干法两种，湿法是将备用的溶剂转入管内，将氧化铝和溶剂调成浆状慢慢地倒入管中，此时应将管的下端活塞打开使溶剂慢慢流出，吸附剂即渐渐沉子管底，加完氧化铝后继续使溶液流出，直至氧化铝的沉降不再变动;干法是在管上端放一漏斗，使氧化铝均匀地经漏斗成一细流慢慢装入管内，中间不应间断，时时轻轻敲打玻璃管使填转均匀，全部加入后再加入溶剂使氧化铝全部润湿。一般以湿法装柱为宜，因为容易把夹杂在氧化铅中的气泡赶出，无论采用那一种方法装柱，必须注意以下事项。①不能使氧化铝中有裂缝和气泡，否则影响分离效果。②氧化铝的高度一般为玻璃管高度的3/4。③装好的氧化铝柱上面覆盖一层滤纸、玻璃纤维或脱脂棉以保持氧化铝上端顶部平整，不受流入溶剂的干扰。④氧化铝柱上面要保持约0. 5 ~ lcm高的溶剂层，勿使氧化铝露出溶剂的液面，上面装一分液漏斗。待柱装妥后，然后加样，把将要分离的样品溶在一定体积的溶剂中配成样品溶液，将氧化铝上的多余溶剂排出，直到柱内液面到达氧化铝的表面时，停止排放。沿管壁加入样品溶液，注意不让溶剂把氧化铝冲松浮起，样品溶液加毕后，开放活塞使液体渐渐放出至溶剂液面和氧化铝表面齐平(勿使氧化铝表面干燥)。样品吸附在氧化铝柱上后，用合适的溶剂进行洗脱，样品中各组分在氧化铝上经过吸附、溶解、再吸附、再溶解······,规律地自上而下移动，使样品分成若干色圈(或称色环)，达到分离、提纯目的。必须注意层析柱的直径愈粗形成的色圈愈狭小，色带相互之间排列愈紧，对分辨和分离难度要大一些，但分离时间较短，速度较快，柱细长对色带相互之间距离增大容易分开，但分离时间长，对装填吸附剂操作不方便，通常选择柱的直径与长度的比例在1：30或1：25及1：20的范围比较合适。- 下一篇：全自动滴定管的操作步骤及注意事项
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